Fagocitna aktivnost leukocita je ispod normalne. Fagocitna aktivnost leukocita

Proučavanje fagocitne aktivnosti leukocita- test krvi, koji ima za cilj određivanje rezervnog kapaciteta neutrofila i monocita da obavljaju svoju glavnu funkciju - apsorpciju i obradu stranih agenasa. Test se izvodi u kompleksu imunograma. Indiciran je za pacijente s rekurentnim i kroničnim infekcijama, stečenim i genetskim imunodeficijentnim stanjima, autoimunim i onkološkim bolestima, koji su podvrgnuti složenim operacijama, uključujući transplantaciju organa. Analizira se puna krv. Studija se zasniva na procjeni fagocitoze bakterija sa fluorescentnim oznakama. Normalno, fagocitni granulociti čine od 82 do 90% ukupnog broja, fagocitni monociti - od 75 do 85%. Spremnost rezultata - do 8 dana.

Fagocitna aktivnost leukocita je laboratorijski pokazatelj koji odražava postotak neutrofila i monocita sposobnih da se vežu za patogenu mikrofloru i da je probave. Fagociti su ćelije koje štite organizam od infekcije. Smatraju se komponentom urođenog imuniteta, u krvi ih predstavljaju dvije vrste leukocita - monociti i neutrofili. Monociti su velike ćelije - makrofagi. Imaju izraženu sposobnost apsorpcije, obrade velikih ćelija i organskih jedinjenja. Na mjestu upale fagocitiraju bakterije, leukocitnu masu, zahvaćene stanice. Kao rezultat, tkiva se čiste i pripremaju za regeneraciju. Neutrofili su mikrofagi; za razliku od monocita, apsorbuju samo male ćelije i organske komponente. Nakon obrade agenasa, neutrofili umiru, oslobađaju tvari koje oštećuju bakterije i gljivice, povećavaju protok imunoloških stanica do mjesta upale.

Test krvi za fagocitnu aktivnost leukocita omogućava vam da procijenite rezervu monocita i neutrofila za probavu stranih agenasa. Promjena karakteristika fagocita odražava ne samo imunološku reaktivnost organizma, već i karakteristike nekih drugih procesa - metabolizam proteina i ugljikohidrata, prisutnost intoksikacije i iscrpljenosti tijela, aktivnost oporavka nakon bolesti itd. Dakle, analiza se koristi ne samo u imunologiji i infektivnim bolestima, već iu reumatologiji, onkologiji, hirurgiji. Rezultati studije su prikazani kao procenat aktivnih fagocita prema njihovom ukupnom broju. Detekcija aktivnih neutrofila i monocita vrši se pomoću bakterija sa fluorescentnim oznakama. Biomaterijal za studiju je puna krv sa heparinom.

Indikacije

Ispitivanje fagocitne aktivnosti leukocita je indicirano za sumnju na kongenitalnu ili stečenu imunodeficijenciju. Propisuje se za dugotrajne, kronične i rekurentne zarazne bolesti - karakterističan znak smanjenja imuniteta. Najčešće se na analizu šalju pacijenti s upalom pluća, sinusitisom, upalom srednjeg uha, enterokolitisom, kandidijazom i cistitisom. Također, dugotrajno nezacjeljujuće rane, komplikacije nakon operacija mogu ukazivati ​​na nedostatak imunološke zaštite. Zbog toga se analiza radi u pripremi za operaciju iu komplikovanom toku postoperativnog perioda, uz dugotrajan oporavak od povreda i opekotina. Ostale indikacije za ovu studiju uključuju alergijske, autoimune i onkološke bolesti. Rezultati omogućavaju procjenu aktivnosti imunološke odbrane (fagocitoze) i njene uloge u nastanku bolesti.

Test krvi za fagocitnu aktivnost leukocita omogućava određivanje stvarne spremnosti tijela da se odupre infekcijama. Međutim, vrijedno je zapamtiti da se ovaj pokazatelj mijenja pod utjecajem mnogih faktora. Tako se aktivnost monocita i neutrofila smanjuje nakon fizičkog napora i mentalnog umora, a povećava nakon unosa visokokalorične hrane. Još jedno ograničenje analize je to što procedura ispitivanja traje do 8 radnih dana, a dobijeni rezultati odražavaju stanje od pre nedelju dana.

Priprema za analizu i prikupljanje materijala

Za proučavanje fagocitne aktivnosti leukocita, krv se uzima iz vene. Dan prije analize treba isključiti alkohol iz prehrane, prekinuti sportske treninge i druge intenzivne fizičke aktivnosti i izbjegavati stresne situacije. Također je potrebno konzultirati liječnika o učinku uzetih lijekova na rezultat studije, moguće je da će neki lijekovi biti privremeno ukinuti. Postupak uzimanja uzorka krvi se obično izvodi ujutro, nakon noćnog gladovanja ili 4 sata nakon obroka.

Punkcijom se uzima krv iz kubitalne vene, a za proučavanje fagocitne aktivnosti leukocita najčešće se koristi metoda procjene fagocitoze bakterija s fluorescentnom oznakom. Monociti i neutrofili se izoluju iz krvi centrifugiranjem i ispiranjem - test materijala. Zatim se u uzorak unosi kultura luminiscentnih bakterija, smjesa se resuspendira i inkubira, a broj leukocita koji su fagocitirali bakterije određuje se intenzitetom luminescencije. Rezultati analize se pripremaju u roku od 7-8 radnih dana. Fagocitna aktivnost monocita i neutrofila može se odrediti i drugim metodama, na primjer, bojenjem fagocitiranih stanica (metoda Romanovsky-Giemsa), aktivnošću lizosomskih enzima, proizvodnjom citokina, prisustvom kationskih proteina.

Normalne vrijednosti

Rezultat krvnog testa na fagocitnu aktivnost leukocita izražava se kao postotak fagocitnih ćelija od njihovog ukupnog broja. Normalne vrijednosti za granulocite su od 82 do 90%, za monocite - od 75 do 85%. Ove brojke su iste za pacijente svih uzrasta i oba pola. Fiziološko smanjenje fagocitoze može se utvrditi tokom trudnoće, nakon fizičke aktivnosti koja ne odgovara nivou treninga i nakon emocionalnog stresa.

Povećanje i smanjenje indikatora

Povećanje fagocitne aktivnosti leukocita nema dijagnostički značaj, uzrok mogu postati akutne infekcije. Aktivnost monocita i neutrofila se povećava u odnosu na početni nivo.

Analiza fagocitne aktivnosti leukocita odnosi se na imunološke metode istraživanja. Njegovi indikatori omogućavaju određivanje rezervne sposobnosti krvnih stanica da apsorbiraju i probave infektivne agense, odnosno spremnost tijela da se odupre razvoju bolesti. Ako su rezultati analize ispod norme, potrebno je konzultirati se s liječnikom - imunologom, infektologom, kirurgom, reumatologom, onkologom. Fiziološki pad performansi može se ispraviti pravilnim odabirom fizičke aktivnosti, prevencijom stresa.

Fagocitna aktivnost neutrofila ljudske krvi u hipotoničnoj podlozi u prisustvu antibiotika

FAGOCITNA AKTIVNOST NEUTROFILA LJUDSKE KRVI U HIPOTONIČNOM SREDINU ANTIBIOTSKIM DJELOVANJEM

AA. Mishchenko, E.M. Savelyeva

AA. Mischenko, E.M. Savelyeva

Fagocitna aktivnost neutrofila ljudske krvi proučavana je u hipotoničnom mediju iu prisustvu brojnih antibiotika. Smanjenje toničnosti za 1,5-2,0 puta uzrokuje povećanje parametara fagocitoze za 16%. U prisustvu furosemida, učinak hipotenzije se ne manifestira. Razni antibiotici izazivaju snažnu inhibiciju fagocitoze.

Ispitivana je fagocitna reakcija humanih neutrofila u hipotoničnom mediju iu prisustvu antibiotika. Smanjenje toničnosti medijuma za 1,5-2 puta dovodi do povećanja parametara fagocitoze za 16%. U prisustvu furosemida djelovanje hipotonije nije prikazano. Razni antibiotici izazivali su snažnu inhibiciju fagocitoze.

Ključne riječi: neutrofil, fagocitoza, fagocitna aktivnost, hipotenzija.

Ključne riječi: neutrofil, fagocitoza, fagocitna aktivnost, hipotoničnost.

Uvod

Glavna prepreka prodiranju infekcije u organizam su sluznice. Kao višekomponentni sistem, učestvuju u mnogim reakcijama organizma, uključujući i imunološke. Normalno, sluznica sadrži imunoglobuline i mali broj neutrofila i makrofaga. Upravo te ćelije prve dolaze u kontakt sa patogenima, dok u slučaju prodora ovih potonjih u debljinu tkiva, limfoidne akumulacije u debljini sluznice postaju barijera.

Budući da površine sluzokože nisu izotonične u odnosu na krvnu plazmu, svrsishodno je provesti eksperimente u anizotoničnom mediju in vitro kako bi se procijenilo funkcionisanje ćelija imunog sistema u takvim uslovima. Tako se pokazalo da se u hipotonskim otopinama u leukocitima aktivira eksplozija kisika, metabolizam arahidonske kiseline i povećava koncentracija kalcijevih iona. U našem radu rađena su istraživanja fagocitne aktivnosti krvnih neutrofila u simulaciji hipotoničnih stanja. Budući da u slučaju upalnog procesa u tijelu liječnici često propisuju antibiotsku terapiju, proučavan je i učinak antibiotika različitih klasa na fagocitnu aktivnost krvnih neutrofila.

Objekti i metode

U eksperimentima je korištena venska krv muških donatora dobivena iz Republičke stanice za transfuziju krvi (Syktyvkar). 500 μl krvi stavljeno je u jažice ploče za imunološke reakcije. U svaku jažicu dodana je suspenzija ćelija kvasca (OOO Saf-Neva) prethodno tri puta isprana sa 0,9% rastvorom NaCl. Broj ćelija kvasca u prosjeku je bio 30 hiljada/1 µl krvi.

Za smanjenje toničnosti za 2,0 i 1,5 puta, u jažice je dodavana destilovana voda (pH 7,4). U nizu eksperimenata, furosemid u koncentraciji od 1*10-5 Mol/l je takođe dodat u jažice sa izo- i hipotoničnom podlogom.

U eksperimentima sa antibioticima, linkomicin, ceftriakson, amoksiklav i gentamicin su dodavani u jažice u koncentraciji od 30 mg/L.

Uzorci su inkubirani u termostatu na 370C 20 min. Zatim je ploča stavljena na led kako bi se zaustavila reakcija fagocitoze i pripremljena su 3 razmaza iz svake jažice. Nakon sušenja i fiksacije, razmazi su obojeni prema Giemsa-Romanovsky i pregledani pod mikroskopom pri imerzionom uvećanju od 15*90.

Izračunati su: 1) fagocitna aktivnost - broj aktivnih neutrofila od 100 pronađenih tokom gledanja; 2) fagocitni indeks - prosječan broj ćelija kvasca koje apsorbira jedan neutrofil. Rezultati su obrađeni metodom parnih poređenja, a značajnost razlika između uzoraka procijenjena je Wilcoxon testom.

Rezultati i diskusija

U kontroli je fagocitna aktivnost leukocita ljudske krvi bila 49,5±5%, fagocitni indeks 1,64±0,1 (n=20). Podaci su u skladu sa rezultatima dobijenim u istraživanju fagocitoze patogene Candida crusei. Fagocitnu aktivnost neutrofila u ovim uslovima stimulišu P-glukani u ćelijskom zidu kvasca, za koje postoje receptori na površini fagocita, kao i opsonizirajući efekat komponenti C3bi sistema komplementa i IgG imunoglobulina prisutnih u krvna plazma.

Sa smanjenjem toničnosti podloge za 1,5 i 2,0 puta (n=20), fagocitna aktivnost je porasla u proseku za 16,5%, i iznosila je 58,1±9,1% (p<0.05). Увеличился также фагоцитарный индекс до 1.97±0.06 и 2.14±0.58 при снижении тоничности в 1.5 и 2.0 раза соответственно. Таким образом, гипотония вызвала активацию фагоцитоза, что отразилось в увеличении как доли активных клеток, так и скорости поглощения фагоцитами дрожжей. Одним из механизмов такого

djelovanje hipotenzije može biti povećanje koncentracije intracelularnog kalcija, što rezultira promjenama u citoskeletu stanica, njihovoj pokretljivosti i fagocitnoj aktivnosti. Pored toga, ćelijska aktivnost pod ovim uslovima može se promeniti kao rezultat pokretanja regulatornog smanjenja volumena, RVD, odgovora na oticanje ćelije. Da bi se isključio uticaj potonjeg, furosemid je inhibirao K+,Cl"-kotransport, čija aktivacija dovodi do RVD.), što je u skladu sa objavljenim podacima Furosemid nije promenio fagocitnu aktivnost u hipotoničnom okruženju u odnosu na kontrolu i smanjio je u poređenju sa rezultatima u hipotoničnom okruženju u odsustvu supstance (str<0.05). В частности, в присутствии фуросемида фагоцитарная активность и фагоцитарный индекс составили 45.9±6.7%; 1.83±0.1 и 50.5±5.6%; 1.7±0.1 соответственно при

hipotenzija 1,5 i 2,0. Stoga, blokiranjem RVD odgovora, furosemid je na taj način spriječio aktivaciju ćelija u uslovima hipotenzije.

Pod dejstvom antibiotika došlo je do smanjenja pokazatelja fagocitne aktivnosti. Pod dejstvom ceftriaksona, fagocitna aktivnost je smanjena za 78% na 10±2,3% (p<0.02), амоксиклав - на 70% до 17±3.9% (р<0.02), линкомицин - на 65% до 16±4.9% (р<0.02), гентамицин - на 76% до 11±3.6% (р<0.02). Фагоцитарный индекс в экспериментах с антибиотиками практически оставался неизменным, следовательно, данные препараты не влияют на скорость поглощения клеток.

Povećanje fagocitne aktivnosti pod uticajem antibiotika zabeleženo je u brojnim radovima. Prema drugim podacima, fagocitna aktivnost leukocita je potisnuta djelovanjem antibiotika kao što je aureomicin. Oksitstraciklin, eritromicin, hloramfenikol, polimiksin B ne izazivaju primjetne promjene u fagocitnoj aktivnosti leukocita.

Antibiotici korišteni u eksperimentima pripadaju različitim grupama prema svom djelovanju. Amoksiklav i ceftriakson djeluju kao baktericidni lijekovi (inhibiraju razvoj ćelijskog zida i inhibiraju sintezu peptidoglikana, mureina, specifičnog za ćelijski zid bakterija). Linkomicin i gentamicin u niskim koncentracijama djeluju bakteriostatično i baktericidno - s povećanjem koncentracije (inhibiraju sintezu proteina vezivanjem za 50-e i 30-e podjedinice ribosoma). Svi antibiotici u našim eksperimentima imali su inhibitorni učinak na neutrofile. To može biti zbog promjene strukture

antibakterijski lijekovi zbog metaboličkih procesa u tijelu, uslijed kojih metabolički proizvodi postaju toksični za

samih fagocita. Antibiotici su jedan od glavnih uzroka neutropenije i agranulocitoze. Ovaj efekat su imali penicilini, cefalosporini i sulfonamidi. Aminoglikozid gentamicin povećava proizvodnju lizosoma koji sadrže različite faktore virulencije. Predstavnici P-laktamskih antibiotika, amoksiklav i ceftriakson, mogu suzbiti reakciju oksidativnog pucanja.

Podaci o učinku linkozamina, koji uključuju korišteni linkomicin, na fagocitnu aktivnost su kontradiktorni. Pri različitim koncentracijama lijeka, autori primjećuju i povećanje fagocitne aktivnosti i njeno smanjenje ili nikakvu promjenu. Moguće je da je koncentracija antibiotika korištenih u našim eksperimentima bila toksična za stanice.

1. U kontroli, fagocitna aktivnost i fagocitni indeks bili su 49,5±5% i 1,64±0,1, respektivno.

2. Zamjena izotonične podloge hipotoničnom uzrokuje povećanje i fagocitne aktivnosti i fagocitnog indeksa za 16,5% odnosno 1,5-2 puta.

3. U prisustvu furosemida, efekat hipotenzije na fagocitnu aktivnost neutrofila se ne manifestuje.

4. Antibiotici ceftriakson, amoksiklav, linkomicin i gentamicin uzrokuju inhibiciju fagocitne aktivnosti neutrofila za 78%, 76%, 65% i 70%, respektivno.

1. Aleshina E.N. Proučavanje djelovanja amorfnih i kristalnih penicilina na mikrobe kuge // Tr. Rostov na Donu Pchi. Rostov na Donu, 1959. T. 15. Br. 1. S. 153-160.

2. Arefieva N.A., Aznabaeva L.F. Imunološke reakcije nazalne sluznice: citološka dijagnostika, metode liječenja // Consilium Medicum. 2009. Tom 11. Broj 11. str. 30-33.

3. Israelson M.I., Shpolyansky B.I., Boevskaya G.I. Utjecaj penicilina na funkcionalnu sposobnost retikuloendotelnog sistema i fagocitnu aktivnost leukocita // Zhurn. mic. epid. i imuno. 1951. br. 3. S. 59-62.

4. Lakin G.F. Biometrija. M.: Više. škola, 1980. 291 str.

5. Finkel E.A., Lutskaya S.I. Autovakcinoterapija za tuberkulozu: Monografija. Kirgistan, 1972. 154 str.

6. Bazzoni F., Cassatella M.A., Laudanna C., Rossi F. Fagocitoza opsoniziranog kvasca izaziva faktor nekroze tumora - akumulaciju alfa mRNA i oslobađanje proteina od strane humanih polimorfnonuklearnih leukocita // J. Leukoc. Biol. 1991. V. 50. br. 3. P. 223-228.

7. Čop J.K., Valiante N.H., Janusz M.J. Fagocitoza partikularnih aktivatora ljudskog alternativnog puta komplementa smatra se monocitnim beta-glukanskim receptorima // Prog. Biol. Res. 1989. V. 297. P. 287-296.

8. De Weck A.L. Farmakološki i imunohemijski mehanizmi preosjetljivosti na lijekove // ​​Immunol Allergy Clin North Am. 1991. br. 11. R. 461-474.

9. Gilliland B.C. Autoimuni i hematološki poremećaji uzrokovani lijekovima // Immunol Allergy Clin North Am. 1991. br. 11. R. 525-553.

10. Hiura M., Ozawa M., Othsuka T. a. o. Stimulacija proizvodnje superoksid aniona u polimorfonuklearnim leukocitima zamorca hipotoničnim stanjem s aktivatorima protein kinaze C // Arch. Biochem. Biophys. 1991. C. 15. br. 291. P. 31-37.

11. Kishi K., Hirai K., Hiramatsu K., Yamasaki T., Nasu M. Klindamicin potiskuje endotoksin koji oslobađa ceftazidimom tretirana Escherichia coli O55: B5 i naknadna proizvodnja faktora tumorske nekroze alfa i interleukina-1 beta // Antimicrob Agents Chemother. 1999. V. 43. br. 3. R. 616-22.

12. Kovaks T., Stas I. i dr. Mehanizmi regulacije volumena humanih granulocita u hipoosmotskim medijima // Acta Biochim. Biophys. objesio. 1989. V. 24, br. 1-2. P. 142-147.

13. DeWeck A.L. Farmakološki i imunohemijski mehanizmi preosjetljivosti na lijekove // ​​Immunol Allergy Clin North Am. 1991. br. 11. R. 461-474.

14. Labro M.T. Farmakologija spiramicina u usporedbi s drugim makrolidima // Drug Invest 1993. 6. Suppl 1. R. 15-28.

15. Lachani M., Usmani S. et al. In vitro učinak furosemideonske hemiluminiscencije polimorfonuklearnih neutrofila u nedonoščadi // Biol.Neonate. 1997. V. 72. br. 3. P. 142147.

16. Muniz-Junqueira MI, Mota LM, Aires RB, Junqueira LF Jr. Digitalis inhibira, a furosemid ne mijenja in vitro fagocitnu funkciju neutrofila zdravih ispitanika // Int Immunopharmacol. 2003. V. 3. br. 10-11. P. 1439-1445.

17. Munoz J., Geister R. Inhibicija fagocitoze aureomicinom // Proc. soc. Exp. Biol. Med. 1950. V. 75. br. 2. R. 367-370.

18. Richardson M.D., Donaldson F. Interakcija Candida crusei s ljudskim neutrofilima in vitro // J. Med. microbiol. 1994. V. 41, br. 6. P. 380-388.

19. Vetvica V., Thornton B.P., Ross C.P. Rastvorljivi beta-glukan polisaharid koji se vezuje za lektinsko mjesto neutrofila ili receptora komplementa prirodnih stanica ubojica tipa 3 (CD 11b/CD 18) stvara aprimirano stanje receptora sposobnog da posreduje u citotoksičnosti IC3b - opsoniziranih ciljnih stanica // J. Clin. Invest. 1996. V. 98. P. 50-61.

Fagocitna aktivnost leukocita- ovo je definicija sadržaja neutrofila i monocita sposobnih da se vežu na svojoj površini, apsorbiraju i probave mikrobnu test kulturu (obilježene bakterije).

Indikacije za imenovanje laboratorijskog testa:

• Česte ponavljajuće infekcije
• rekurentni gnojni upalni procesi,
• dugotrajne rane koje ne zacjeljuju,
• česte postoperativne komplikacije,
• sumnja na autoimunu bolest
• dinamičko praćenje takvih pacijenata, evaluacija aktivnosti i efikasnosti terapije za kolagenoze i reumatske bolesti.

Uzroci povećane fagocitne aktivnosti leukocita:

• akutne bakterijske infekcije.

Razlozi za smanjenje fagocitne aktivnosti leukocita:

• kongenitalne imunodeficijencije
• hronične infekcije
• autoimune bolesti
• alergijske bolesti
• virusne infekcije
• sindroma humane imunodeficijencije

Posebna priprema za studiju nije potrebna. Neophodno je pridržavati se općih pravila pripreme za istraživanje.

OPŠTA PRAVILA PRIPREME ZA ISTRAŽIVANJE:

1. Za većinu studija preporučuje se davanje krvi ujutro, između 8 i 11 sati, na prazan želudac (najmanje 8 sati treba proći između posljednjeg obroka i uzimanja krvi, vodu možete piti kao i obično), uoči studije, lagana večera uz ograničenje masne hrane. Za testove na infekciju i hitne pretrage, prihvatljivo je davanje krvi 4-6 sati nakon posljednjeg obroka.

2. PAŽNJA! Posebna pravila pripreme za brojne pretrage: strogo na prazan želudac, nakon 12-14 sati gladovanja, treba dati krv na gastrin-17, lipidni profil (ukupni holesterol, HDL holesterol, LDL holesterol, VLDL holesterol, trigliceridi, lipoprotein (a), apolipo-proten A1, apolipoprotein B); test tolerancije na glukozu radi se ujutro na prazan želudac nakon 12-16 sati gladovanja.

3. Uoči istraživanja (u roku od 24 sata) isključiti alkohol, intenzivnu fizičku aktivnost, uzimanje lijekova (po dogovoru sa ljekarom).

4. 1-2 sata prije davanja krvi uzdržite se od pušenja, nemojte piti sokove, čaj, kafu, možete piti negaziranu vodu. Uklonite fizički stres (trčanje, brzo penjanje stepenicama), emocionalno uzbuđenje. Preporučuje se da se odmorite i smirite 15 minuta prije davanja krvi.

5. Krv za laboratorijska ispitivanja ne treba davati odmah nakon fizioterapijskih procedura, instrumentalnih pregleda, rendgenskih i ultrazvučnih pregleda, masaže i drugih medicinskih zahvata.

6. Prilikom praćenja laboratorijskih parametara u dinamici, preporučuje se ponavljanje istraživanja pod istim uslovima - u istoj laboratoriji, davanje krvi u isto doba dana itd.

7. Krv za istraživanje treba dati prije početka uzimanja lijekova ili ne prije 10-14 dana nakon prestanka uzimanja lijekova. Za procjenu kontrole učinkovitosti liječenja bilo kojim lijekovima, potrebno je provesti studiju 7-14 dana nakon posljednje doze lijeka.

Ako uzimate lijekove, obavezno o tome obavijestite svog ljekara.

Laboratorijska evaluacija poremećaja urođenog imuniteta

Funkcionalna procjena B-limfocita

Određivanje koncentracije imunoglobulina u krvnom serumu i drugim biološkim tečnostima jedan je od najvažnijih integralnih pokazatelja funkcionalne korisnosti B-limfocita i cjelokupnog sistema regulacije humoralnog adaptivnog imuniteta.

Tradicionalno je određivana koncentracija serumskih imunoglobulina metodom radijalne imunodifuzije u gelu prema Manciniju. Trenutno se ova metoda još uvijek koristi, prednost se daje monoklonskim antitijelima protiv pojedinačnih antigenskih determinanti (epitopa) karakterističnih za pojedine klase imunoglobulina.

Princip Mancinijeve metode leži u činjenici da se uzorci proučavanih seruma stavljaju u agar jažice, koje sadrže antitijela protiv IgM, IgG, IgA u standardnoj koncentraciji. Imunoglobulini sadržani u test serumu difundiraju u agar i, u interakciji s odgovarajućim antitijelima, formiraju precipitacijske prstenove. Sve dok postoji višak antigena u bušotini, dolazi do postepenog povećanja prečnika precipitacionog prstena. Konačna veličina precipitacijskog prstena ovisi o koncentraciji odgovarajućih imunoglobulina. Mancinijeva metoda vam omogućava da odredite koncentraciju imunoglobulina jednaku 10 μg / ml. Greška metode je 10%.

Za dijagnosticiranje poremećaja urođenog imuniteta obično se utvrđuje fagocitna i metabolička aktivnost neutrofila i procjenjuje stanje sistema komplementa.

Najinformativnijim za procjenu fagocitnog sistema treba smatrati fagocitni indeks, fagocitni broj (odražava apsorpcijski kapacitet neutrofila) i baktericidni indeks (odražava probavni kapacitet neutrofila).

Fagocitni indeks(FI) - procenat ćelija koje su ušle u fagocitozu, od njihovog ukupnog broja.

fagocitni broj(PF) je prosječan broj apsorbiranih bakterija ili čestica lateksa po neutrofilu.

Također održano testovi spontane i stimulirane fagocitoze korištenjem čestica lateksa. Fagocitoza lateksom se zasniva na apsorpciji čestica lateksa od strane neutrofila (adhezija, hvatanje i potpuna apsorpcija).

Prilikom provođenja spontanog testa, leukociti izolirani iz periferne krvi pomiješani su sa suspenzijom čestica lateksa; tokom testa indukovane fagocitoze, u dobijenu smešu se dodaje pirogenalni rastvor. Nakon inkubacije na 37 0 C u trajanju od 30 minuta, pripremaju se brisevi, a zatim se izračunava postotak neutrofila koji su apsorbirali lateks u fiksnim i brisevima obojenim po Romanovsky-Giemsi.

Test redukcije nitroplavog tetrazolija–NST-test omogućava procjenu metaboličke aktivnosti krvnih granulocita, otkriva rezervni kapacitet intracelularnih sistema fagocita. NBT test se bazira na redukciji rastvorljive boje, nitroplavog tetrazolija, koju leukociti krvi apsorbuju u nerastvorljivi crni diformazan (intranuklearne inkluzije - diformazanske grudice) pod uticajem superoksidnog anjona koji nastaje u reakciji NADP-H-oksidaze, koji pokreće proces stimulacije fagocitoze.

Izjava o reakciji. 0,02 ml 0,9% rastvora natrijum hlorida, 0,02 ml neutrofilne suspenzije i 0,02 ml 0,75% rastvora NBT (nitrozin tetrazolijuma) nanese se na staklo bez masti.

Kao opterećenje koristi se komercijalni lipopolisaharid gram-negativnih bakterija E. coli ili pirogenalni rastvor (S. typhi lipopolisaharid) u razrjeđenju 1:10. 0,02 ml LPS-a, 0,02 ml neutrofilne suspenzije i 0,02 ml 0,75% HBT rastvora se nanese na drugu obranu čašu. Stavite u vlažnu komoru na 30 minuta. Razmazi se pripremaju, suše, fiksiraju. Bojana 0,1% neutralnom crvenom otopinom. Neutrofili se uzimaju u obzir izračunavanjem procenta leukocita sa smanjenim HBT granulama (crni diformazan).